自動(dòng)型凱氏定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì)含量的試驗(yàn)全過(guò)程
蛋白質(zhì)是人體中一個(gè)重要的組成部分，對(duì)人體的監(jiān)健康有著重要的影響，同樣在其他生物跟動(dòng)物之中也是如此，所以蛋白質(zhì)含量的測(cè)定是一個(gè)非常重要的課題，今天我們來(lái)說(shuō)說(shuō)用自動(dòng)型凱氏定氮儀測(cè)定蛋白質(zhì)含量的試驗(yàn)全過(guò)程。
1 預(yù)消化及溫度控制因素
1.1預(yù)消化
在消煮前,如能對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)消化,則消煮時(shí)間可縮短。所謂預(yù)消化,就是提前l(fā)d將樣品稱好,放人開氏管中,加上催化劑及消煮液,反應(yīng)12h,這樣可避免由于噴濺損失而給測(cè)定結(jié)果帶來(lái)的影響,這一點(diǎn)對(duì)含纖維素及脂肪高的樣品尤為重要,這類樣品的消煮液也要酌情多加。
1.2溫度的有效控制
在剛開始消煮時(shí),一定要低溫,并在剛有發(fā)泡沸騰時(shí)就將開氏管從電爐上取下,讓其沸騰停止后再放上電爐,這樣不易因沸騰劇烈而導(dǎo)致開氏管壁粘上樣品,待高溫時(shí)形成炭粒而無(wú)法進(jìn)人開氏管瓶底部消煮,使蛋白質(zhì)損失。在消煮中,當(dāng)開氏管內(nèi)的樣品由黑色變?yōu)楹稚珪r(shí)應(yīng)將爐溫調(diào)低,或者將開氏管移到電爐子的邊緣,以防因爐溫太高而使小漏斗被氣體頂?shù)?此點(diǎn)尤其在消煮土壤樣品時(shí)更應(yīng)注意。
2 蒸餾中堿液皿的適度控制
在蒸餾時(shí)應(yīng)根據(jù)加人消煮酸的多少來(lái)確定加人NaoH溶液量。堿液加少了,氮素沒(méi)有全部從消煮液中轉(zhuǎn)化出來(lái),造成測(cè)定結(jié)果偏低;而堿液加人太多,又造成浪費(fèi)。通過(guò)多年測(cè)試分析,我們認(rèn)為加堿量是加酸量的5一6倍,堿的濃度為40%(WlW)。加堿量適中,在開始蒸餾后,消煮液呈黃褐色,但這個(gè)范圍很窄。在加人堿量不足時(shí),溶液呈白藍(lán)色,太多時(shí)又呈藍(lán)色。
3 硫酸滴定液的濃度與樣品含氮且的關(guān)系
選用H2sO4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定蒸餾液時(shí),其濃度的大小,取決于樣品含氮量的高低。兩者最終以適度的滴定體積來(lái)決定。適度的耗酸量控制在5.00耐左右,滴定體積太小,則誤差幾率增大,滴定體積太大,又浪費(fèi)時(shí)間,降低工作效率,尤其是在大批量測(cè)定時(shí)更為突出。
4 體系的空白
每批次測(cè)定時(shí)都應(yīng)有空白樣,用空白樣的消耗量來(lái)監(jiān)測(cè)批次間的情況,一般空白消耗量在0.30時(shí)左右。如果硼酸接收液增加,則空白值也會(huì)有一些升高。如果空白值太高、太低,都要查找原因,否則會(huì)造成蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果的正負(fù)誤差。
