組培培養室對試管葡萄根苗繁殖的可行性
利用組培培養室對葡萄根苗進行試管的繁殖方法,是我國作物研究的一個重大突破。此技術是利用試管苗在組培培養室條件下即可進行大規模的繁殖和開發,從而解決了室內繁殖條件要求高、外移易污染的問題,為今后生物技術領域大規模組培繁殖、生產開發提供了一條實現高移栽成活率、低成本、實用化強的技術途徑。
1 技術特點
1.1 組培培養室葡萄試管的繁殖方法,取代了傳統的組培培養室繼代生產繁殖模式,實現了常規條件下的繁殖生產,解決了組培繁殖易污染的問題。
1.2 在組培培養室內繁殖時以蛭石為培養基質,減少了實驗室精密儀器、設備以及各種化學藥品的大量投入,從而大大降低了生產成本。
1.3 技術操作簡單易行,繁殖增殖效率高。
1.4 生產繁殖的幼苗健壯,株型緊湊,葉片濃綠,抗病性強,外移成活率高。
1.5 組培培養室葡萄試管的繁殖方法,可移植應用于其他多種名貴木本、花卉組培試管苗的大規模繁殖與開發。
2 操作要點
2.1 組培培養室的建造及相關設備安裝根據繁殖任務的需要,建造(或改造) 1座組培培養室,坐北朝南,并覆膜和安裝自動防寒被(或草苫)。
防寒被(或草苫)上架設可收放的透光率50%左右的遮陽網,網、膜之間的距離最小不得少于50 cm.棚內按畦寬110~115m南北向做畦鋪設地熱線,地熱線埋深4~5 cm.畦面踩實耙平。
購置蛭石(粒徑1~3mm)、育苗盤、營養缽、竹片、薄膜等物資。
2.2 組培培養室的補濕與消毒以上設備安裝完畢后,溫室內噴水補濕,使空氣濕度達到70%以上。為防止植物材料污染,使用前可用重量比為5︰3的甲醛+高錳酸鉀進行進行溫室內熏煙消毒。每100m2棚內面積用量約為2 kg甲醛+112 kg高錳酸鉀。消毒時,先將高錳酸鉀放入一較大的容器內(防止藥物反應后藥液溢出),再將甲醛倒入容器,然后,人員迅速撤出溫室。
2.3 試管苗的瓶內馴化將達到要求高度的葡萄試管苗(一般每株小苗達5~7節,繁殖系數可達到6左右)移入組培培養室,擺放于畦內進行馴化。溫室溫度控制在15~30e,濕度控制在50% ~70%.在規定溫度范圍內,逐漸增強溫室內的光照強度,使瓶內試管苗逐漸適應組培培養室內的溫度和濕度環境條件。當光照強、溫度高時,進行遮光管理,以防止燒苗。一般馴化3~5 d即可,期間逐漸打開封口膜。當打開封口膜后,試管苗無萎蔫現象時,即可進行扦插繁殖。
2.4 育苗盤(扦插盤)的處理將育苗盤裝滿蛭石后用木板刮平,然后浸于配制好的營養液中(營養液為1/2~1/4不含糖的改良B5葡萄培養液),浸透后取出,控去多余水分,按2 cm@2 cm左右株行距劃格定位。備用。
2.5 莖段的扦插將已馴化好的試管苗用鑷子從培養瓶中取出,按統組培方法把試管苗單節剪斷。將單節莖段速蘸生根液后,按劃定好的位置扦插在育苗盤內,扦插深度以達到葉柄處為宜。待每個育苗盤扦插完畢,噴灑滅菌藥液,以防止污染致病。同時彌合插孔,使扦插材料與蛭石緊密接觸。
2.6 扦插后的管理首先接通地熱線,提高地溫。再將噴灑滅菌藥液后的扦插苗盤,擺放在鋪有地熱線的畦內。擺滿后支小拱棚,并覆蓋薄膜。如果扦插季節較早,棚內溫度較低,可在小拱棚外再覆以無紡布,以保持小拱棚內的溫度。
小拱棚內置溫度計,將晝夜溫度控制在25~28e.扦插莖段生根后(扦插后3~5 d),視葉片的適應情況逐漸撤除薄膜煉苗,使之適應棚內的溫度和濕度條件。此時,莖段基本已生根且根系較短,可移栽至營養缽內。
2.7 小苗移栽及管理按園土、廄肥體積比為(4~5)B1的比例配制好營養土,使用上口直徑6 cm、高12 cm的營養缽移栽小苗。將生根小苗移栽至營養缽后,緊密擺放在畦內,澆透水并噴灑滅菌藥劑,以防止小苗染病。
在移栽小苗的畦上支小拱棚,保溫保濕。小拱棚內溫度控制在22~28e;濕度從100%逐漸降低,至與溫室濕度相同。隨著日齡的增加,小苗達2葉1心時,逐步打開小拱棚進行煉苗。全部小拱棚撤除薄膜后,視情況澆水,并隨施1次015%的復合肥水。
2.8 煉苗外移苗高達到3~4葉時,大田移栽前,要逐漸打開溫室棚膜煉苗,并控制澆水,使之適應棚外的自然條件,以保證外移成活率。
如果連續進行繁殖,可用營養缽苗為繁殖材料,重復初代扦插程序即可。
3 繁殖結果
3.1 生長特征組培培養室微型扦插繁殖的30日齡赤霞珠幼苗較同日齡培養室繁殖苗(對照)相比,小苗株型緊湊,根系發達,莖蔓粗度為對照的115倍以上,高度低于對照,但挺拔健壯,葉色濃綠,外移成活率高(表1)。在低溫、高濕條件下很容易感染立枯病而大量死苗,最高死苗率高達80%以上。
3.2 抗病性 在傳統的組培繁殖過程中,當試管苗外移馴化時但利用組培培養室進行微型扦插培養的赤霞珠小苗,基本解決了爛苗、死苗問題,提高了外移成活率(表2),從而極大地降低了生產成本。
3.3 繁殖效率在培養室繁殖增殖條件下,1名熟練的室內繼代轉接技術人員每天可轉接試管苗200瓶約1000株。而在組培培養室微型扦插繁殖條件下,1名熟練的普通工人每天可扦插3000株左右�?梢�,微型扦插繁殖效率可提高2~3倍以上,從而大大降低了人工費用。
