凱氏定氮操作使用中的一些建議
凱氏定氮法雖然創建已經有近100年的歷史，但直到現在它仍然是測量蛋白質最常用的方法。在50年代凱氏定氮法的蒸餾過程大部分直接加熱的�，F在的實驗室中，全自動定氮儀已經取代了凱氏定氮儀，測量過程更加快速準確，使用也更加方便。
今天主要說一些凱氏定氮法測定蛋白質含量的一些問題與建議。關于滴定過程,現在硼酸已經取代了標準鹽酸或硫酸用以吸收蒸餾出來的氨水。國內某些單位的分析室也有采用自動滴定裝置的,這里不準備介紹了。
1、用凱氏定氮法測定多種元素的建議
自從凱氏法問世以來,不少研究工作者建議結合有機質的消化過程,把土壤中的礦物質也同時分解完全,在消化液中測定“N和P、“N和K或其他更多一些的元素,1975年Pabinson等8,提出以凱氏的消化體系為基礎,用含有過氧化氫、硒和硫酸鏗的硫酸混合液來消化土壤和植株樣品,測定項目包括N、P、K、Na、Ca、Mg、Fe以及Cu、Mn、Zn等各個元素�，F將這個方法簡介如下:
試劑配制:
在350毫升H:中,加入0.42克Se粉,14克LiZSO;,H:O混合均勻,然后在邊攪拌邊冷卻下小心地加入420毫升硫酸(比重1.84)。制成的混合消化液在1OC下保存。
方法:
稱取一定量的通過0.5毫米篩孔的(在IOSOC下干燥)樣品(植株為0.4克,土壤為0.2克),置于50毫升長頸回流燒瓶中。加4.4毫升混合消化液,在電熱器上用小火慢慢加熱,反應平穩后加大火力直到殘留的有機質的微黃色消失,繼續消化20分鐘(一般共需1.5小時)。溶液冷卻后再根據需要加以稀釋,用下列方法進行N、P、K及主要礦質離子的測定。
N—用艾杜酚蘭(idophenolblue)比色法P—用釩鉑黃比色法K、Na—用火焰光度計法測定Ca、Mg—用原子吸收光譜法測定(每公升加入400毫升La,并加入HZSO使最終溶液中含1%的H聲04K—用磺化紅菲繞琳(sulphonatedbathophenantholine)比色法Cu,Mn和Zn—用原子吸收光譜法測定根據Pakinson的研究,含有過氧化氫,硒粉及硫酸鏗的硫酸溶液,能夠破壞植物組織、土壤有機質和礦物質,使礦質離子及N、P元素完全進人溶液。由于混合消化液中Se的含量很低,不會對磷的測定產生干擾,少量的硫酸鏗既能提高消化液的溫度,縮短消化時間又不會影響K、Na的測定,但硫酸銼用量不宜過多。Pakinson還指出,用這種消化法獲得的結果與常用的混合酸或凱氏消化法獲得的結果相當一致。
2、凱氏定氮法消化過程中康氣處理問題
在早期的分析工作中,濕法消化時所產生的濃煙,(主要是505、S()2、COZ、HoO)不是由通氣櫥抽排出去的,而是將它們吸收在氫氧化鈉溶液或其它溶液中(在消化瓶上加塞,以玻璃管引導氣體進人NaOH溶液,再把氣體從NaOH溶液中排出。在導人氣體和排出氣體的兩支玻璃管上,都附有幾個保險球)。這樣,實驗室中并不感覺到有污染的氣體,我們也曾經建議把凱氏法消化時所發生的氣體導人1NNaOH溶液中,再用標準的氧化液滴定堿液中所吸收的502,從還原性氣體的含量而計算出有機碳的當量,這樣就可以把定氮和定碳結合進行。雖然這個方法對碳的回收值要比通用的K:CZO7-H:50劑消化法低一些,但這也說明,濕法消化在沒有通氣櫥設備時,也是可以進行的。
如果消化是在鋁塊消煮器中進行的,則可將濃煙匯合在一個玻璃管中并導人40%的NaOH溶液中,再通人下水道排放出去。
早期的實驗證明,應用頸長為30厘米凱氏消化瓶,塞上帶有玻璃管的橡皮塞后加熱,將冒出來的氣體導人到吸收液中,而瓶口附近回流的氣體并不腐蝕橡皮塞,當然,對分析結果也無影響。因此,我們認為在鋁塊加熱器上消化用的試管可以不采用玻璃接口,而改用有彈性的耐腐蝕的橡皮塞,這樣可以防止消化時漏氣。目前,在國外市場上雖然有幾種定型的自動分析儀供錢的蒸餾和滴定用,但是在國內一般的實驗室中對于凱氏消化法也已作了許多改進,主要是簡化設備,加速分析步驟等,收到了較好的效果,因而似無必要向國外購置成套的自動分析儀。
